在為新物料或新產(chǎn)品、中間產(chǎn)品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法時(shí)，常會(huì)遇到各種困難，尤其是尚處于新藥研發(fā)早期階段的藥物。此時(shí)，由于藥物制劑、緩沖系統(tǒng)等還不穩(wěn)定，經(jīng)常會(huì)發(fā)生變化，這樣就給方法的建立帶來(lái)了不同程度的影響。在建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法之前，須盡可能多地了解有關(guān)該藥品的基本信息，例如：有關(guān)樣品的可溶性信息、推薦的稀釋液、在水中的溶解度以及合適溶劑，樣品的pH范圍，分子量大?。蝗绻堑鞍桩a(chǎn)品，還要了解該產(chǎn)品的等電點(diǎn)，產(chǎn)品規(guī)格、體積或重量，擬用于臨床的用法和用量等，以便選擇合適的樣品處理方法和內(nèi)毒素檢測(cè)方法。 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水需符合滅菌注射用水標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒素含量有明確限值且無(wú)干擾。江蘇疫苗內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)升級(jí)

針對(duì)單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法（MAT）通過(guò)檢測(cè)內(nèi)毒素的生物活性，有效規(guī)避低內(nèi)毒素回收（LER）對(duì)內(nèi)毒素檢測(cè)的影響。其原理是：熱原（包括被掩蔽的 LPS）活化單核細(xì)胞表面的 TLR 受體，釋放 IL-6 等細(xì)胞因子，通過(guò) ELISA 檢測(cè) IL-6 濃度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線推算熱原含量。即使 LPS 因 LER 改變超分子結(jié)構(gòu)，只要仍具生物活性，就能被 MAT 法識(shí)別。這種 “檢測(cè)活性而非結(jié)構(gòu)” 的特性，使 MAT 法成為 LER 場(chǎng)景下內(nèi)毒素檢測(cè)的重要補(bǔ)充，與其他方法協(xié)同構(gòu)建高效可靠的熱原防控體系。 北京疫苗內(nèi)毒素檢測(cè)商業(yè)化試劑盒內(nèi)毒素檢測(cè)需關(guān)注制劑成分，螯合劑和表面活性劑可能誘發(fā)“低內(nèi)毒素回收（LER）”。

低內(nèi)毒素回收（LER）又稱內(nèi)毒素掩蔽，是指無(wú)菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，加標(biāo)內(nèi)毒素的回收率＜50% 的現(xiàn)象，且無(wú)法通過(guò)稀釋排除，區(qū)別于傳統(tǒng)檢測(cè)干擾。LER 會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素污染被低估，已被全球監(jiān)管機(jī)構(gòu)重點(diǎn)關(guān)注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報(bào)時(shí)提交 LER 研究報(bào)告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數(shù)據(jù)；中國(guó)藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內(nèi)容，與國(guó)際接軌。這些要求促使企業(yè)優(yōu)化內(nèi)毒素檢測(cè)流程，避免因 LER 導(dǎo)致的檢測(cè)偏差，確保藥品**。

當(dāng)實(shí)驗(yàn)室更換內(nèi)毒素檢測(cè)方法或更換試劑供應(yīng)商時(shí)，需進(jìn)行方法比對(duì)與橋接驗(yàn)證。比對(duì)實(shí)驗(yàn)需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測(cè)，計(jì)算結(jié)果相關(guān)性（如相關(guān)系數(shù) R?≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗(yàn)證還需評(píng)估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認(rèn)對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當(dāng)。若方法變更涉及法規(guī)申報(bào)產(chǎn)品，需將驗(yàn)證數(shù)據(jù)納入申報(bào)資料，證明變更后方法仍能有效控制內(nèi)毒素風(fēng)險(xiǎn)，符合 FDA、NMPA 等監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)方法變更的合規(guī)性要求。 細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁脂多糖，細(xì)菌死亡裂解釋放，微量級(jí)即致人體發(fā)熱、休克等威脅。

內(nèi)毒素檢測(cè)常與熱原檢測(cè)混淆，二者既有關(guān)聯(lián)又有區(qū)別：熱原是指所有能引起發(fā)熱的物質(zhì)（包括內(nèi)毒素、病毒、真菌等），通過(guò)傳統(tǒng)家兔熱原試驗(yàn)檢測(cè)；內(nèi)毒素是熱原的主要成分（占 90% 以上），檢測(cè)更具特異性。目前，家兔熱原試驗(yàn)因操作復(fù)雜、動(dòng)物成本高，已逐漸被單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法（MAT）替代，但部分產(chǎn)品（如放射性質(zhì)藥物、血液制品）仍需保留家兔試驗(yàn)作為補(bǔ)充。法規(guī)要求內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果需與熱原風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)，若內(nèi)毒素檢測(cè)合格但臨床出現(xiàn)熱原反應(yīng)，需排查是否存在非內(nèi)毒素類熱原，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)確保產(chǎn)品**性。 塑料器皿對(duì)內(nèi)毒素吸附力強(qiáng)，制備內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）稀釋液建議用硼硅酸鹽玻璃管。江蘇疫苗內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)升級(jí)

外源性熱原含細(xì)菌內(nèi)毒素、脂磷壁酸、酵母多糖等，單核細(xì)胞活化反應(yīng)檢查法可檢出全部熱原。江蘇疫苗內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)升級(jí)

湖州申科生物重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）采用基因工程技術(shù)合成，完全模擬了天然鱟試劑中的酶促級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)。重組鱟試劑反應(yīng)體系中包含重組C因子、重組B因子和重組凝固酶原。當(dāng)供試品中存在內(nèi)毒素，重組C因子識(shí)別內(nèi)毒素后活化，會(huì)依次級(jí)聯(lián)活化下游重組B因子和重組凝固酶原。凝固酶原轉(zhuǎn)化為具有生物活性的凝固酶后，識(shí)別并催化下游帶顯色基團(tuán)的底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。顯色反應(yīng)的強(qiáng)度和內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)，從而定量檢測(cè)內(nèi)毒素。本產(chǎn)品用于定量測(cè)定人用和動(dòng)物用注射藥物、生物制品及**器械等樣品中的細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。 江蘇疫苗內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)升級(jí)