內毒素檢測鱟試劑的反應受pH的干擾。在進行檢測時，要調節(jié)被測溶液的pH值，使鱟試劑與供試品溶液的混合溶液pH值落在鱟試劑指定的使用pH范圍內（一般鱟試劑作用pH值在6.0~8.0范圍內)。用于調節(jié)pH值的試液或溶液（酸或堿)，可采用BET用水配制，并將溶液在無熱原容器中儲存；必須對試液或溶液進行驗證，以證明不含可檢出的內毒素并且無干擾因素。調節(jié)pH試劑（酸或堿）的添加量，不應該超過供試品的1092。如果超過10%，則在進行計算時，將DH試劑的添加量的系數(shù)計算進去。 凝膠法鱟試劑通過觀察凝膠形成定性內毒素，操作簡便，適合**器械內毒素檢測初篩。上海非動物源內毒素檢測風險評估

實驗數(shù)據(jù)充分證明，內毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑的檢測結果具有高度等效性，可實現(xiàn)方法無縫切換。對細胞培養(yǎng)輔料、凍干甲型肝炎疫苗、單抗 A/B 等 8 類代表性樣品的平行檢測顯示，rCR 的檢測平均值為 0.001-0.026EU/mL，天然鱟試劑為 0.002-0.034EU/mL，兩者偏差≤0.003EU/mL。加標回收率方面，rCR 為 70%-175.4%，天然鱟試劑為 82.2%-156.6%，均處于 50%-200% 的合格范圍。批內精密度上，rCR 的 CV 值為 0.524%-14.716%，天然鱟試劑為 0.908%-12.348%，均滿足法規(guī)對精密度的要求。這種等效性確保了實驗室在切換至重組試劑時，歷史數(shù)據(jù)和工藝控制標準的連續(xù)性，降低方法轉換風險。 江蘇生物制品內毒素檢測LER現(xiàn)象細菌內毒素檢測中，rCR 加標回收率穩(wěn)定在 50%-200% 藥典范圍，可準確完成檢測。

內毒素檢測的實驗方案需遵循“標曲可靠性驗證（靈敏度復核）-稀釋倍數(shù)計算-干擾試驗”的完整流程，以保障檢測結果準確合規(guī)。首先進行標曲可靠性試驗，用標準內毒素制備至少3個濃度的稀釋液（相鄰濃度間稀釋倍數(shù)不超過10，下限濃度不低于鱟試劑標示檢測限），每濃度設 3 支平行管，同時做2支陰性對照；當陰性對照的吸光度小于或透光率大于標準曲線下限的檢測值或反應時間大于標準曲線下限的反應時間，對數(shù)據(jù)進行線性回歸，相關系數(shù)r的幅值≥0.980時試驗方有效，否則需重新操作。接著按公式 L=K/M 確定樣本內毒素限值，K 值依給藥途徑而定，M結合人均60kg體重、1.62m? 體表面積及上限給藥劑量計算，也可參考藥典行標。隨后明確有效稀釋上限倍數(shù)（MVD），即供試品允許稀釋的上限倍數(shù)，確保在此范圍內檢測限值。再開展樣本干擾試驗，制備供試品溶液（A）、供試品加標溶液（B，加標濃度為標曲中點）、標準曲線溶液（C）及陰性對照（D），按公式 R=(Cs-Ct)/λm×**計算加標回收率，50%-200%為合格；若鱟試劑、生產工藝等發(fā)生變化，需重新進行干擾試驗，保障內毒素檢測的可靠性。

在為新物料或新產品、中間產品建立細菌內毒素檢測方法時，常會遇到各種困難，尤其是尚處于新藥研發(fā)早期階段的藥物。此時，由于藥物制劑、緩沖系統(tǒng)等還不穩(wěn)定，經常會發(fā)生變化，這樣就給方法的建立帶來了不同程度的影響。在建立細菌內毒素檢查法之前，須盡可能多地了解有關該藥品的基本信息，例如：有關樣品的可溶性信息、推薦的稀釋液、在水中的溶解度以及合適溶劑，樣品的pH范圍，分子量大小；如果是蛋白產品，還要了解該產品的等電點，產品規(guī)格、體積或重量，擬用于臨床的用法和用量等，以便選擇合適的樣品處理方法和內毒素檢測方法。 動態(tài)顯色法鱟試劑監(jiān)測吸光度變化定量內毒素，抗干擾強，適配復雜基質樣品檢測。

隨著動物保護理念和法規(guī)要求升級，重組因子C法（rFC法）作為 LAL 法的替代技術逐漸普及。重組 C 因子是以基因重組的方式表達的 LAL 試劑中的 C 因子，C 因子被內毒素活化后切割熒光底物產生游離熒光基團，通過檢測熒光信號可以反應活化后的蛋白酶活性，并由此可以推算出內毒素的含量。與傳統(tǒng) LAL 法相比，rFC 法無需依賴鱟血資源，避免了天然 LAL 試劑批間差異大、易受 β- 葡聚糖干擾等問題，且反應特異性更強。目前，《美國藥典》、《歐洲藥典》等法規(guī)已收錄 rFC 法，歐盟更推薦其用于疫苗等高風險產品檢測，在保證檢測準確性的同時，符合動物福利和可持續(xù)發(fā)展要求。 湖州申科凝膠法鱟試劑符合藥典要求，配抗增液抑制非特異性反應，多靈敏度可選。上海**器械內毒素檢測合規(guī)申報

內毒素工作標準品（CSE）稀釋液配制時渦旋很重要，可使內毒素充分溶解，保證濃度準確。上海非動物源內毒素檢測風險評估

低內毒素回收（LER）又稱內毒素掩蔽，是指無菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進行內毒素檢測時，加標內毒素的回收率＜50% 的現(xiàn)象，且無法通過稀釋排除，區(qū)別于傳統(tǒng)檢測干擾。LER 會導致內毒素污染被低估，已被全球監(jiān)管機構重點關注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報時提交 LER 研究報告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數(shù)據(jù)；中國藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內容，與國際接軌。這些要求促使企業(yè)優(yōu)化內毒素檢測流程，避免因 LER 導致的檢測偏差，確保藥品**。 上海非動物源內毒素檢測風險評估