可比性驗證是支原體檢測 NAT 方法替代傳統(tǒng)檢測方法的關鍵依據，法規(guī)明確要求需將 NAT 法與藥典規(guī)定的傳統(tǒng)方法進行檢測限（LOD）對比。若以 NAT 法替代培養(yǎng)法，需證實其檢測限≤10CFU/mL；替代指示細胞培養(yǎng)法時，每種被測支原體的檢測限需≤100CFU/mL。對比實驗需采用相同樣本同步開展 NAT 檢測與傳統(tǒng)方法檢測，通過 CFU 可比性分析，確保兩種方法的檢測結果具有一致性。這一要求既保障了新方法的檢測效能不低于傳統(tǒng)標準，又為生物制品企業(yè)切換檢測方法提供了合規(guī)依據，兼顧了效率提升與質量**。 支原體兼具胞內胞外生存特性，檢測需裂解細胞而非只取上清，避免漏檢胞內污染。北京復雜基質支原體檢測使用性驗證

湖州申科生物構建了完整的支原體檢測解決方案，包含支原體 DNA 提取純化試劑盒與檢測試劑盒兩大產品。提取純化試劑盒采用磁珠法技術，具有回收率高、樣品兼容性強的優(yōu)勢，配合湖州申科 rHCDpurify®前處理系統(tǒng)可實現自動化提取操作，大幅提升檢測效率并減少人為誤差。檢測試劑盒采用 PCR - 熒光探針法，覆蓋近200種支原體 DNA 序列，檢測專一性強，且對不同品牌 PCR 儀器具有良好的適用性，性能穩(wěn)定可靠。產品規(guī)格明確，提取試劑盒可處理 50 個樣品，檢測試劑盒可完成 50 次反應，整套體系從樣品前處理到定性檢測形成閉環(huán)，滿足生物制品生產各環(huán)節(jié)的支原體篩查需求。 北京重組藥物支原體檢測驗證菌株支原體檢測中，檢測限驗證需對每種支原體做3次10倍梯度稀釋，獲取24個數據滿足95%檢出率。

湖州申科構建了覆蓋全領域、全場景的支原體檢測一站式合規(guī)解決方案。產品矩陣豐富，包括支原體 DNA 提取純化試劑盒（2G）、檢測試劑盒（2G，PCR - 熒光探針法）、DNA 校準品、一體化檢測卡盒、外源因子全自動核酸分析系統(tǒng)，以及 10 余種支原體驗證菌株（已上市豬鼻、肺炎、口腔支原體等，即將上市發(fā)酵、精氨酸支原體等）。方案具備極強的場景適配性，可應對 5% 人白、高濃度細胞等復雜基質樣品，支持從起始材料到終產品的全流程檢測，滿足細胞療法、抗體、疫苗、CRO/CDMO 等不同領域的檢測需求。服務層面，提供從方法學建立、樣品檢測、適用性驗證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對到特殊菌株定制的全流程技術支持，配合企業(yè)完成監(jiān)管機構現場審計，滿足企業(yè)從 IND 到 BLA/NDA 的申報需求，實現 “極簡操作、一步加樣、避免污染、全量檢測” 的價值。

菌株質量是支原體檢測 NAT 方法驗證合規(guī)的關鍵，GC/CFU 比（基因組拷貝數與菌落形成單位比值）是關鍵控制指標。支原體存在聚集特性，單一 CFU 可能對應多個菌體，且 DNA 復制與細胞**不同步，部分菌體無法形成菌落但會釋放 DNA，導致 GC/CFU 比波動大（研究報道 0.1 CFU 對應 30-500 個基因組拷貝）。若使用高 GC/CFU 比菌株，會高估檢測限、導致方法靈敏度不足，因此法規(guī)明確要求菌株 GC/CFU 比＜10。2024 年 EDQM 36.1 草案規(guī)定參考品 GC/CFU 比應小于 10，USP 77 征求意見稿要求表征菌株 GC/CFU 比、建立菌株庫 CFU 與核酸拷貝數關系，JP G3-14-170 也對菌株質量提出明確要求，凸顯合規(guī)菌株選擇的重要性。 疫苗病毒種子批支原體檢測需取全量樣品，建議進行 10mL 種子液提取，確保無漏檢。

支原體是一類無細胞壁的原核微生物，直徑只有 0.1-0.8 ?m，常規(guī) 0.22 ?m 細菌過濾器無法有效去除，其污染在細胞培養(yǎng)領域極為普遍。這類微生物會嚴重干擾培養(yǎng)細胞的表型特征與正常生長，給生物制品質量**帶來極大隱患，且與細菌、真菌污染不同，支原體污染通常不會導致培養(yǎng)液渾濁或細胞可見病變，需通過專業(yè)方法檢測。基于此，FDA、WHO 等全球監(jiān)管機構及 USP、EP、ChP 等主流藥典均明確要求，對測試細胞庫（主細胞庫、工作細胞庫）、下游細胞培養(yǎng)物、終產品及對照細胞等關鍵環(huán)節(jié)開展支原體污染篩查，確保生物制品生產全流程**可控。 支原體標準菌株對支原體檢測試劑盒的選擇、使用及驗證至關重要。北京復雜基質支原體檢測可比性驗證

支原體檢測 NAT 法引物設計需平衡覆蓋范圍與特異性，避免交叉反應。北京復雜基質支原體檢測使用性驗證

湖州申科 MycoSHENTEK® 支原體檢測解決方案以合規(guī)性為中心，具備突出的驗證優(yōu)勢。該方案的試劑盒已完成 FDA 的 DMF 備案，經過 FDA 嚴格審核確認準確性與合規(guī)性，企業(yè)可直接引用備案信息，簡化海外申報流程，降低審查不確定性，減少材料準備周期。方案通過了與合規(guī)機構的三方驗證，聯合合規(guī)機構獲取標準菌株盤、建立 GC 比檢測方法，共同開展提取效率驗證、引物設計優(yōu)化、反應體系與儀器程序開發(fā)，并由合規(guī)機構指導參與室間驗證及檢測限、專屬性、耐用性等關鍵性能驗證，嚴謹性與專業(yè)性獲得行業(yè)認可。此外，方案還能為企業(yè)提供 NDA/BLA 申報驗證支持，降低申報風險，同時涵蓋試劑盒、設備、菌株、檢測驗證服務、現場審計等全流程服務，一站式解決企業(yè)整合成本高、流程復雜的痛點。 北京復雜基質支原體檢測使用性驗證